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快3二同技巧_川芎嗪对骨髓移植小鼠造血重建的影响.doc


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快3二同技巧_川芎嗪对骨髓移植小鼠造血重建的影响.doc
文档介绍:
快3二同技巧_川芎嗪对骨髓移植小鼠造血重建的影响         活血化瘀中药川芎嗪具有保护放射及免疫损伤造血微环境的作用[1,2]。快3二同技巧我们建立了同基因骨髓移植小鼠模型,探讨川芎嗪在造血干细胞移植骨髓造血重建中的作用及其机制,为寻找促进造血干细胞移植后骨髓重建造血的治疗方法提供科学依据。材料和方法1 实验动物清洁级近交系BALB/c小鼠(H-2d,MLSb),8~10周龄,体重17~20g,雌雄兼用,由同济医科大学实验动物中心提供。于照射前3d至照射后14d以200U/只剂量喂庆大霉素水清洁胃肠道。快3二同技巧2 药物磷酸川芎嗪注射液,含量为磷酸川芎嗪25mg/ml,丽珠利民制药厂生产。3 试剂和仪器羊抗小鼠CXCR4多抗(Fusin)及FITC-大鼠抗羊IgG单抗购自北京中山公司。4 分组及处理 BALB/c小鼠68只,分为3组。正常组8只,未做任何处理;单纯骨髓移植(BMT)组及BMT+川芎嗪处理组(下简称川芎嗪组)各30只,经以下步骤处理:①照射:总剂量8.0cGy60Coγ射线全身均匀照射,剂量率为173.91cGy/min;②BMT模型的建立:参照文献[3]介绍的方法,取15只健康正常的BALB/c小鼠(H-2d,MLSb),颈椎脱臼处死后立即取双侧股骨制备有核细胞悬液并计数、调整细胞浓度至5×106/ml,将此有核细胞悬液在3h内经尾静脉输入受照射的BMT组及川芎嗪组小鼠体内,输入细胞数为106个/只,液体量0.2ml/只;③用药:BMT模型建成后,川芎嗪组小鼠立即腹腔注射磷酸川芎嗪注射液2mg/只,每天2次;单纯BMT组同时腹腔注射生理盐水0.2ml/只,每天2次。5 外周血细胞计数将BMT后第1、第7、第14、第28天各组小鼠取眼眶血处死,收集眶血以二乙酸四乙二钾抗凝。计数外周血红细胞、白细胞和血小板数。6 骨髓单个核细胞(BMMNC)计数以上各组小鼠处死后立即取双侧股骨,分离出BMMNC并计数。7 骨髓组织学观察将BMT后第1、第7、第14、第21、第28天小鼠处死后即取双侧尺骨,以体积分数为10%的中性甲醛固定,采用文献[1]的方法,低温塑料包埋,室温下尺骨中段横面切片和矢状切面,HE-Giemsa染色,于10×40高倍镜下使用5×5网格计微器观察以下指标:①为估算造血组织的增生度、脂肪组织增生情况和微血管、血窦扩张破裂出血的程度,随机计取15个视野中造血组织、脂肪组织、微血管及血窦中红细胞各自的点击数,并计算各自所占的比例即为以上三者各自所占的容量;②计数每个切面上15个高倍镜视野(HGF)下的巨核细胞数求得每HGF下平均巨核细胞数,以观察巨核细胞系的恢复情况;③通过观测每个切面上每根微血管所占的平均网格数,估算微血管的扩张程度。8 CXC趋化因子受体4(CXCR4)表达水平分析将BMT后第7、第14、第21天组小鼠处死后,分离出BMMNC后参照文献[4]的方法,用流式细胞仪测定各组CXCR4的表达水平。9 统计学分析数据均以<"9903031.jpg(732字节)"src="/med/cano/201003/201003**********.jpg"1517>±s表达,采用t检验。表1 小鼠外周血细胞计数及BMNC计数(<"9903031.jpg(732字节)"src="/med/cano/201003/201003**********.jpg"1517 内容来自上海快三下载app送18元彩金—主页-彩经_彩喜欢豆网yowjizz.com转载请标明出处.